Prendere quattro provette pulite e misurare 100 microlitri di acetato di etile nel primo con la pipetta Altre istruzioni
. Aggiungere 50 microlitri al secondo , 25 al terzo e 5 al quarto.
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Cambiare i puntali delle pipette e aggiungere acqua deionizzata ad ogni provetta . Per la prima provetta aggiungere 1,8 mL , 1,9 mL poi al secondo tubo , 1,95 mL al terzo tubo e 1,6 mL al quarto . Mescolare con la punta della pipetta per mescolare , avendo cura di cambiare le punte delle pipette tra i tubi .
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Trasferire 1 ml della miscela in ogni tubo a quattro cuvette pulite . Anche in questo caso , assicurarsi di cambiare le punte delle pipette tra i tubi .
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Inserire il primo dei quattro cuvette in un tranciata , spettrofotometro calibrato e misurare l'assorbimento a 215 nm . Se non siete sicuri di come cambiare la lunghezza d'onda e /o vuoto spettrofotometro , consultare le istruzioni del fabbricante; la procedura può variare leggermente a seconda del dispositivo . Registrare il valore si misura e di prendere le misure per i contenuti degli altri tre cuvette .
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Prendete un imbuto separatore pulito e assicurarsi che il rubinetto di scarico o alla fine viene chiuso . Rimuovere il tappo in alto .
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Aggiungere 2 mL di acetato di etile , seguita da 15 ml di acqua e 15 mL di ottanolo . Se necessario , potete sostenere il vostro imbuto separatore con un anello su un anello di stare in piedi mentre lo fate .
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Togliere l'imbuto di vetro e sostituire il tappo . Tenere l'imbuto di separazione in due mani con una mano posizionata sopra il tappo per assicurarsi che non fuoriesca . Agitare l'imbuto avanti e indietro un paio di volte . Quindi inclinarlo all'indietro e aprire il rubinetto per alleviare la pressione . Ripetere questa procedura fino ad aver scosso i contenuti per un totale di 30 secondi o giù di lì . Assicurati sempre agita una o due volte e poi scaricare la pressione. Se si consente la pressione di accumularsi all'interno , potrebbe causare il tappo a venire fuori e rilasciare tutti i contenuti sul vostro banco di laboratorio .
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Posizionare l'imbuto di separazione su un anello attaccato ad un supporto ad anello . Lasciare il contenuto di separare in due strati . Lo strato superiore è ottanolo ; lo strato inferiore è acqua . Raccogliere la fase acquosa e misurare la sua capacità di assorbimento nella regione UV dello spettro .
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Mettere una piccola ( ~ 25 mL) pallone sotto l' imbuto separatore e drenare alcuni mL dello strato di acqua nel pallone . Togliere 1 mL del contenuto del pallone con il micropipetta e trasferirlo ad una cuvetta pulita.
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Inserire la cuvetta nello spettrofotometro e misurare l' assorbimento a 215 nm .
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Prendete i vostri dati di assorbanza e di entrare in un programma di foglio elettronico come Open Office o Excel . Per i quattro campioni di acetato di etile hai preparato all'inizio, immettere la normalità in una colonna e l' assorbimento in una colonna vicina . La molarità per i quattro campioni è il seguente : 100 microlitri del campione : 0,5091 molare ; 50 del campione microlitro : 0,2545 molare ; 25 del campione microlitro : 0,1273 molare ; e 5 microlitri del campione : . 0,02545 molare
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Utilizzare il programma di foglio elettronico per preparare un grafico diagramma a dispersione di questi quattro punti dati con molarità o concentrazioni sul asse x ed assorbenza sulla y . Se non siete sicuri di come fare questo , consultare il manuale dell'utente o il menu di aiuto per il programma di foglio elettronico . Utilizzando il programma di foglio elettronico , montare una equazione lineare o linea di best fit della forma y = mx + b a questi dati . La variabile x in questa equazione è la concentrazione , mentre la variabile y è la capacità di assorbimento .
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Prendete l'assorbimento del vostro mL del campione di acetato di etile 2 dal imbuto separatore e dividerlo per il m valore dall'equazione tuo programma di foglio di calcolo e di sottrarre il valore-b . Se il valore - m è 1.2 , per esempio , e il valore b è 0.2 mentre l'assorbimento è 0,42 , sottrarre 0,2 da 0,42 e dividere il risultato per 0.5 per ottenere una concentrazione di 0,183 moli per litro .
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Moltiplicare il valore della concentrazione da 0,015 litri da quando avevi 10 ml di acqua nel vostro imbuto separatore . Se la vostra concentrazione era 0,183 , per esempio , si potrebbe moltiplicare per 0,015 per ottenere 2,745 x 10 ^ -3 moli di acetato di etile presenti .
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Sottrarre il risultato dal punto 14 da 0,02036 moli di acetato di etile , che era l'importo originariamente aggiunto . Se tu avessi 2,745 x 10 ^ -3 moli nello strato di acqua , per esempio , sottrarre questo numero da 0,02036 moli avere 0,01762 moli presenti nello strato di ottanolo .
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dividere l'importo presente nel ottanolo strato dalla quantità presente nello strato d'acqua , e questo ti dà il coefficiente di ripartizione del liquido . Questo esempio utilizza l'acetato di etile , ma è possibile utilizzare altri liquidi, fino a quando si regolano le concentrazioni ei valori per molarità appropriato .