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Tecniche Colonna di verifica in HPLC
cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC ) è uno strumento prezioso per i chimici organici moderni, perché permette loro non solo di separare una miscela nei suoi componenti , ma anche per quantificare la quantità di ciascuno è presente. Anche se i dispositivi HPLC sono strumenti sofisticati , le loro prestazioni possono gradualmente deteriora nel tempo . Per assicurarsi che funzionino correttamente e fornire risultati affidabili , è importante verificare periodicamente le loro prestazioni . Portata &
Pressione

La pompa deve essere in grado di mantenere i tassi di flusso accurate. Test della portata è molto semplice e comporta solo la misurazione della quantità di tempo necessaria per raccogliere una quantità arbitrariamente scelto di solvente dalla colonna in diverse impostazioni di velocità . Pressione della pompa può essere testato collegando l'uscita della pompa con un morto - dado e collegamento di un registratore per misurare la pressione pompa - testa. La pressione dovrebbe aumentare rapidamente per circa 3.000 libbre per pollice quadrato ( PSI ) , quindi aumenta più gradualmente ad una pressione maggiore , a questo punto la pompa si spegne automaticamente . Se la pressione oscilla a 3.000 PSI o diminuisce rapidamente dopo la pompa si spegne , ma di solito implica un malfunzionamento , come una perdita nel sistema .
Gradient

La pompa deve anche essere in grado di variare con precisione la composizione della fase solvente o mobile , eluendo così o soluzioni di lavaggio dalla colonna composti non polari sempre come la percentuale dei meno polari aumenta solvente . Precisione gradiente viene analizzato utilizzando due canali alla volta , uno dei quali fornisce solvente puro e l'altro un solvente con un tracciante chimico disciolto , come la caffeina . Come la concentrazione del secondo aumenta soluzione , è possibile misurare la luce ultravioletta ( UV) assorbanza dell'uscita della colonna e utilizzare questi dati per verificare l'accuratezza gradiente .
Injector Module

precisione del modulo iniettore può essere verificato eseguendo sei iniezioni ripetute con un singolo campione ; discrepanze significative nei risultati suggeriscono hai un problema . Alcuni esperimenti prevedono volumi di iniezione variabile , quindi è anche importante per testare la capacità del iniettore per disegnare la giusta quantità di campione . Effettuando iniezioni in tutto il da 0 a 100 microlitri , un chimico in grado di ottenere e tracciare i dati e determinare la correlazione tra i risultati e la concentrazione del campione . Una debole correlazione suggerisce un malfunzionamento .
Modulo del rivelatore

Il record del modulo rivelatore di assorbanza per soluto e solvente di eluizione o scorre dal fondo della colonna , quindi la sua precisione è particolarmente critico per garantire buoni risultati . Molti strumenti HPLC includono capacità di verifica lunghezza d'onda incorporata per garantire la lunghezza d'onda del rivelatore utilizza è lo stesso di quello selezionato . Un altro test comporta l'uso di una serie di campioni che contengono una concentrazione crescente di un composto come caffeina . Il chimico può quindi tracciare i risultati contro la concentrazione della soluzione di prova e determinare la forza della correlazione . Una debole correlazione suggerisce un malfunzionamento .