ottenere un piatto per le cellule . Lavare la piastra due volte con 10 ml di PBS ( tampone fosfato salino ) senza calcio e magnesio . Aggiungere 2 ml di separatore ( tripsina ) . Incubare la piastra per tre minuti a 37 gradi Celsius. Osservare la piastra al microscopio per assicurare che le cellule hanno staccato . Spostare delicatamente sulla piastra per staccare tutte le cellule dal fondo della piastra . Aggiungere 10 ml di HEK ( keratinocyctes epidermiche umane) e FCS (siero fetale di mucca ) medio . Utilizzare una pipetta 10 ml per spostare le celle su e giù.
2
Osservare le cellule sotto il microscopio per assicurare che siano singole cellule . Pipettare usando la pipetta 10 ml fino a quando le cellule sono singole , se necessario . Centrifugare le cellule per due minuti a 1.000 giri al minuto . Scartare il surnatante . Mettere le cellule in 10 ml di siero fetale bovino . Centrifugare le cellule ancora per due minuti a 1.000 giri al minuto . Scartare il surnatante . Mettere le cellule in 200 microlitri di soluzione di registrazione esterno . Osservare le cellule sotto il microscopio per celle singole con una membrana liscia .
3
Mettere la soluzione salina all'interno di un chip di patch clamp . Aggiungere una goccia di soluzione di elettrolita intracellulare alla parte inferiore del chip mediante pipetta. Montare il chip su un tappo di torsione. Il tappo torsione deve contenere l'elettrodo di riferimento e la linea di aspirazione . Aggiungere una goccia di soluzione elettrolitica extracellulare all'inizio del chip mediante pipetta. La soluzione elettrolitica consente il chip per fare contatto con l'elettrodo . Aggiungere 5 microlitri di sospensione cellulare alla soluzione salina nel chip . Posizionare una singola cella utilizzando aspirazione attraverso una pipetta . Aspirazione può essere eseguita manualmente aspirando aria attraverso la pipetta . Posizionando la resistenza aumenti cellulari per formare una tenuta . La guarnizione consente di indagine di tutta la cellula.