Misura 200 mg di BSA in peso di carta utilizzando una scala di laboratorio . Racchiudere in una provetta . Aggiungere 2 ml di tampone per la provetta contenente 200 mg di BSA . Etichettare questo tubo " 1"
2
Tubo Vortex 1 fino a quando la BSA è completamente sciolto .
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Elimina 500 ul della BSA in tampone e trasferimento ad un secondo tubo . Etichettare questo tubo " 2 " Aggiungere 500 ul di tampone pianura a tubo 2
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Elimina 200 ul di BSA in tampone dalla provetta 1 e trasferirlo in una nuova provetta . Etichettare questo tubo " 3 " Aggiungere 800 ul di tampone pianura a tubo 3
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Elimina 100 ul di BSA in tampone dalla provetta 1 e trasferirlo in una nuova provetta . Etichettare questo tubo " 4 " Aggiungere 900 ul di tampone evidente Provetta 4
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Elimina 10 ul di BSA in tampone dalla provetta 1 e trasferirlo in una nuova provetta . Etichettare questo tubo " 5 " Aggiungere 990 ul di tampone pianura a tubo 5. Tubi 1- 5 comprendono una serie standard graduata . Il primo tubo ha una concentrazione nota di 100 mg /ml ; il secondo , 50 mg /ml ; il terzo , 20 mg /ml , il quarto , 10 mg /ml ; e il quinto , 1 mg /ml . Ogni tubo contiene circa 1 ml di soluzione .
Crea anticorpi in diluizione
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Aggiungi 5 0ul di anticorpo purificato al 95 0ul di tampone . Etichettare questo tubo "A"
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Aggiungere 10 ul di anticorpo purificato da 990 ul di tampone . Etichettare questo tubo " B"
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Aggiungi 2 ul di anticorpo purificato da 998 ul di tampone . Etichettare questo tubo " C "
Caricare la piastra
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IL 0,5 ml di tampone pianura nei primi pozzi in due colonne della piastra pozzetti .
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Inserire 0,5 ml del contenuto della provetta 1 nel secondo pozzetti delle prime due colonne della piastra multipozzetto . Proseguire lungo la serie graduata fino a quando le prime due colonne contengono 0,5 ml di una soluzione standard di BSA da ciascuno dei tubi 1-5 , compresi pozzi per buffer di pianura .
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Aggiungere 0,5 ml di reagente Bradford a ciascun bene . Agitare la piastra per miscelare il reagente con le soluzioni proteiche , facendo attenzione a non versare il contenuto di qualsiasi dei pozzi . Attendere 5 minuti .
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Leggi la piastra secondo il protocollo specifico per il vostro lettore di piastre alla lunghezza d'onda di 595 nm .
Calcolare Concentrazione dell'anticorpo
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Copiare i valori letti dal lettore di piastre in Microsoft Excel .
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Creare un grafico da due colonne di valori che rappresentano lo standard BSA utilizzando la Creazione guidata Grafico in Microsoft Excel .
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Tracciare i punti misurati dalle diluizioni degli anticorpi nel grafico di Excel . Leggi la corrispondente concentrazione di proteine in base al valore di y per il punto diluizione anticorpo sul grafico di Excel .
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A seconda se si sta utilizzando i valori ottenuti dalla metropolitana A , B o C , moltiplicare il valore sia 20 , 40 o 500 , rispettivamente. Il valore risultante è la concentrazione del vostro anticorpo purificato .